ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞
對(duì)活細(xì)胞影響少，適用于長(zhǎng)時(shí)間成像的ER染色試劑
本產(chǎn)品是活細(xì)胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide系ER染色試劑相比，對(duì)細(xì)胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養(yǎng)基后也可進(jìn)行觀察。
※ 本產(chǎn)品是funakoshi基于京都大學(xué)工學(xué)研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產(chǎn)品。

ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞

對(duì)活細(xì)胞影響少，適用于長(zhǎng)時(shí)間成像的ER染色試劑

 

 

本產(chǎn)品是活細(xì)胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide系ER染色試劑相比，對(duì)細(xì)胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養(yǎng)基后也可進(jìn)行觀察。

 

※ 本產(chǎn)品是funakoshi基于京都大學(xué)工學(xué)研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產(chǎn)品。

※ 本產(chǎn)品僅供研究使用。

 

◆現(xiàn)有ER染色試劑的問題點(diǎn)以及ERseeing的優(yōu)勢(shì)

過去通用的ER染色試劑是將熒光染料附著于在ER中特異表達(dá)的K⁺ 通道拮抗劑Glibenclamide上，并廣泛用于ER的可視化。然而，由于以下的問題，應(yīng)用范圍有限。

●  由于Glibenclamide的藥理效果，通道活性被抑制，對(duì)細(xì)胞的影響大。

●  由于是可逆的拮抗劑，因此通過培養(yǎng)基交換等的清洗操作非常容易去除。

與之相對(duì)的，ERseeing是一種新型ER染色試劑，具有與Rhodol綠色熒光染料相連的蛋白標(biāo)記基團(tuán)，對(duì)ER膜成分具有很高的親和力。通過選擇性地集中在ER上并用熒光基團(tuán)標(biāo)記ER蛋白，可以進(jìn)行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更換含有FBS的培養(yǎng)基，因此可應(yīng)用于任何的培養(yǎng)基和試劑處理環(huán)境下的長(zhǎng)期成像。

 

 

	傳統(tǒng)產(chǎn)品 （熒光標(biāo)記Glibenclamide）	本產(chǎn)品 （ERseeing）
原理	在ER中發(fā)現(xiàn)的ATP敏感性鉀離子通道中  的特異性配體Glibenclamide用熒光標(biāo)記  后，在與受體結(jié)合時(shí)實(shí)現(xiàn)可視化。	將蛋白標(biāo)記基團(tuán)添加到Rhodol綠色熒光染  料中，其對(duì)ER膜成分具有很高的親和力。  通過對(duì)ER上的蛋白質(zhì)進(jìn)行熒光標(biāo)記實(shí)現(xiàn)可  視化。
對(duì)細(xì)胞的影響	由于Glibenclamide的藥理效果會(huì)抑制鉀  離子通道，影響細(xì)胞功能。此外，由于依  賴鉀離子通道表達(dá)量，有些細(xì)胞可能無法  染色。	不顯示藥理效果，對(duì)細(xì)胞功能幾乎沒有  影響。
不清洗觀察活細(xì)胞	良好	良好
清洗后觀察活細(xì)胞	靈敏度低	良好
染色后固定	可以，但是存在部分染色靈敏度低的可能性	良好

 

◆原著論文

Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

 

◆特點(diǎn)

●  激發(fā)/熒光波長(zhǎng)：509 nm/524 nm

    ※  可利用一般的綠色·色素FTIC的觀察條件

●  與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide系染色試劑相比，可以很好地抑制對(duì)細(xì)胞的影響。

●  即使培養(yǎng)基中含有ERseeing也可以進(jìn)行觀察。

    ※  如果在培養(yǎng)基中長(zhǎng)時(shí)間染色的話，或許會(huì)出現(xiàn)色素呈油滴狀聚集等非特異性染色的情況。若想提高特異性，建議清洗后再觀察。

●  由于是不可逆性染色，染色后可更換培養(yǎng)基。染色后可在含有FBS培養(yǎng)基等的任意培養(yǎng)基中成像。

●  活細(xì)胞染色后，也可固定后觀察。還可以與免疫染色法組合使用。

    ※  本試劑不適用于固定后細(xì)胞的染色。染色請(qǐng)使用活細(xì)胞。

 

◆應(yīng)用實(shí)例

■  ERM的激發(fā)·熒光光譜

 

 

 

激發(fā)光譜（藍(lán)）和熒光光譜（綠）

※  適用于一般綠色熒光色素FTIC觀察條件

 

■  驗(yàn)證ER特異性

 

 

 

通過與各種細(xì)胞器標(biāo)記共染色評(píng)價(jià)本試劑的ER特異性。觀察到ERseeing（100 nM）與現(xiàn)有的Glibenclamide系ER染色試劑高度共定位（Pearson相關(guān)系數(shù)>0.9）。另一方面，未觀察到與溶酶體標(biāo)記和線粒體標(biāo)記的共定位。高爾基體標(biāo)記觀察到部分共定位，可能是本試劑標(biāo)記的蛋白通過高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)，從ER轉(zhuǎn)移至分泌途徑。然而，添加ER-Golgi轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的話會(huì)減少與高爾基體的共定位。（詳情請(qǐng)參考原著論文）

 

■  評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)滯留性

 

 

向無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞內(nèi)添加ERseeing以及傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide，染色15 min后進(jìn)行觀察（左）。然后，更換含有10%FBS的培養(yǎng)基再次觀察。熒光標(biāo)記Glibenclamide在清洗后熒光信號(hào)明顯消失了，但是由于ERseeing是不可逆染色的，清洗后也能觀察到很強(qiáng)的熒光信號(hào)。使用ERseeing進(jìn)行ER染色后，可以在含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并進(jìn)行各種成像。

 

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	包裝
FDV-0038	ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green>	10 nmol

 

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