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參考價 | ¥300-¥5000 | /盒 |
參考價:¥300 ~ ¥5000
更新時間:2024-11-21 18:31:29瀏覽次數:689評價
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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/96樣 50管/48樣 |
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貨號 | EY-01S1229 | 應用領域 | 生物產業 |
主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性:
產品名稱:海藻糖6磷酸合成酶(TPS)生化檢測試劑盒
規格:100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S1229
測試方法:微量法 紫外分光光度法
分類:蔗糖系列
商品詳情:
測定意義:
海藻糖是由兩個糖分子以α,α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖,廣泛存在于細菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機體中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩定性。另外,它本身具有很強的吸水性,使它在生物體內具有抗脫水作用,在逆境條件下可通過識別外界刺激、產生和傳遞信號、基因表達和代謝調節來保護植物免受不良環境的傷害。
植物體內主要以糖為底物合成海藻糖,該反應首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸糖(UDPG)和 6-磷酸糖反應生成中間產物6-磷酸海藻糖,再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose6-phosphate phosphatase,TPP)的作用下去磷酸化,生成海藻糖。因此,測定TPS活性對于研究植物逆境具有重要意義。
測定原理:
TPS 催化 UDPG 與 G6P 生成海藻糖-6-磷酸,同時產生 UDP;UDP 在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化 NADH 為 NAD+,NADH 的下降速率與 UDP 含量成正比,通過 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取:
1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
ADH測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
3、操作表:
試劑名稱(μL) | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。
注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
NAD-MDH活力單位的計算:
1、血清(漿)NAD-MDH活力的計算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA
V反總:反應體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;2000:細胞或細菌總數,2000萬。
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