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參考價 | ¥300-¥5000 | /盒 |
參考價:¥300 ~ ¥5000
更新時間:2024-11-22 09:37:06瀏覽次數(shù):837評價
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣 50管/24樣 |
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貨號 | EY-01S1379 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 僅用于科研 |
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
糖原磷酸化酶b(GPb)生化檢測試劑盒 | 100管/48樣 50管/24樣 | EY-01S1379 |
測定意義:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1,4-糖苷鍵移去糖基,釋放1-磷酸糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點前4個糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。
測定原理:
GP催化糖原和無機磷產(chǎn)生糖殘基生成糖原和1-磷酸糖,磷酸糖變位酶和6-磷酸糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時測定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)時測定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑一:液體×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四:液體×1支,4℃保存。
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
(3)按細胞數(shù)量計算
活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細胞數(shù)量
(4)按液體體積計算
活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應時間,1min。
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