化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠嗅上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1259 |
商品介紹：
名稱 大鼠嗅上皮細胞 2.組織來源：嗅上皮組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠嗅上皮細胞分離自嗅上皮組織；嗅上皮細胞是鼻腔的嗅區(qū)黏膜的一種特殊的感覺性上皮細胞，嗅上皮細胞為棱形雙極細胞，每個細胞表面為細長的嗅毛，突出于嗅區(qū)黏膜上皮細胞表面，而細胞的另一端為中央突，常匯成多數(shù)細微的嗅絲，組成嗅神經(jīng)通向顱內(nèi)。這些細胞的特殊結(jié)構(gòu)，是嗅覺功能的重要組成部分。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠嗅上皮細胞采用膠原酶-胰蛋白酶聯(lián)合消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠嗅上皮細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R192 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Optineurin / OPTN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Lysozyme 2 / LYZL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CASK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ERN1 / IRE1 (aa 465-977) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PTPN12 (aa 1-355) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PTPN2 / PTPT 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
MERTK / Mer (aa 578-872) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DUSP3 / VHR 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠嗅上皮細胞PE-Cy7標記的羊抗人IgGAnti-SPRY2 Antibody水晶蘭科5945-50-6價格
Cy3標記的羊抗人IgGAnti-SPHK2 Antibody擬人參皂苷F1169884-00-0價格
Cy5標記的羊抗人IgGAnti-SPR Antibody酸83-44-3品牌
Cy5.5標記的羊抗人IgGAnti-SPI1 Antibody斑蝥素56-25-7品牌
PE-Cy3標記的羊抗人IgGAnti-SPN Antibody(原貨號PB0114)葉綠醇150-86-7說明書
PE-CY5標記的羊抗人IgGAnti-SPRY4 Antibody蓮心堿2586-96-1品牌
APC標記的羊抗人IgGAnti-SPTLC1 Antibodyanemarsaponin和136565-73-6品牌
Alexa Fluor 350標記的羊抗人IgGAnti-SQSTM1 Antibodyα-當歸內(nèi)591-12-8品牌
化工儀器網(wǎng)