化工儀器網
詳細介紹
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| NK細胞 | 1×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1431 |
商品介紹：
名稱 NK細胞 NK細胞確切的來源還不十分清楚，一般認為直接從骨髓中衍生，其發育成熟依賴于骨髓的微環境。小鼠和人的體外實驗表明，胸腺細胞在體外IL-2等細胞因子存在條件下培養也可誘導出NK細胞。小鼠脾臟在體內IL-3誘導下可促進NK細胞的分化。NK細胞主要分布于外周血中，占PBMC5～10%，淋巴結和骨髓中也有NK活性，但水平較外周血低。 由于NK細胞具有部分T細胞分化抗原，如80～90%NK細胞CD2+，20～30%NK細胞CD3+（表達CD3ζ鏈），30%NK細胞CD8+（α/α）和75～90%NK細胞CD38+，而且NK細胞具有IL-2中親和性受體，在IL-2刺激下可發生增殖反應，活化NK細胞可產生IFN-γ，因此一般認為NK細胞與T細胞在發育上關系更為密切。 與T細胞、B細胞相比，NK細胞表面標志的特異性是相對的。人NK細胞mIg-，部分NK細胞CD2、CD3和CD8陽性，表達IL-2受體β鏈(P75、CD122），CD11b/CD18陽性。常用檢測NK細胞的標記有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。 一種穩定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細胞在IL-2條件下培養20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。 NK細胞活化途徑： 1、通過CD3分子的ζ鏈 NK細胞不表達TCR/CD3復合物，但部分NK細胞表達CD3ζ鏈，當用CD16抗體刺激NK細胞活化時，ζ鏈發生酪氨酸磷酸化，引起胞漿內Ca2+濃度升高，IP3水平增加，促進細胞因子合成和ADCC作用。 2、通過CD2分子 CD2與CD58相互作用或用CD2McAb刺激可活化NK細胞，CD3ζ鏈發生酪氨酸磷酸化。 3、自然殺傷細胞刺激因子 自然殺傷細胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor，NKSF)對NK細胞有刺激作用。 IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細胞調節素(leukoregulin，LR)對NK細胞的活化和分化有正調節作用，體外培養時加入上述細胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素(PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質激素等對NK細胞的活性有抑制作用。 NK細胞表面具有IL-2中親和性受體，IL-2誘導NK的殺傷活性約需18-24小時。此外，IL-2還可誘導NK細胞的增殖，一般在刺激后3～4天開始發生增殖，其機理為IL-2可誘導NK細胞表達IL-2Rα鏈，新表達的α鏈與原先細胞表面的β鏈和γ鏈結合形成高親和性受體，在IL-2存在下刺激NK細胞發生增殖。IL-2誘導NK細胞的活性機理尚不清楚，可能與增加細胞粘附分子的表達，提高對NK抵抗靶細胞的殺傷活性有關，還可能增加NK細胞胞漿中的顆粒以及絲氨酸酯酶mRNA的表達，活化和促進殺傷介質的殺傷作用。 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CD16a / FCGR3A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD28 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD19 / Leu-12 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
COQ7 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL-29 / Interleukin-29 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
恒河猴 ErbB2 / HER2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
恒河猴 ErbB2 / HER2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 ErbB2 / HER2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NK細胞Saccharomyces cerevisiae血管內皮生長因子抗體檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae血漿蛋白檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae促性腺釋放抗體檢測試劑盒
Zygosaccharomyces rouxii補體受體1檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiaeβ-伴大豆球蛋白檢測試劑盒
Kloeckera apiculata抗豬圓環病抗體檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae多氧化檢測試劑盒
Torulaspora delbrueckii核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白1檢測試劑盒
化工儀器網