詳細介紹
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性:
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
小鼠腸動脈平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1393 |
商品介紹:
名稱 小鼠腸動脈平滑肌細胞
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冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TETHERIN / BST2 / CD317 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 PGRL / IGSF8 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 MFI2 / CD228 / melanotransferrin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TIGIT / VSTM3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 NAALADL1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TROP2 / TACSTD2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠腸動脈平滑肌細胞生長釋放肽 95%β-硫丹標準溶液 100μg/ml,u=3%Anti-VSIG4 /FITC 熒光素標記T負調節蛋白之一抗體IgG
Boc-L-谷-1-叔丁酯 98%β-硫丹標準溶液 10μg/ml,u=5%Anti-VSV-G tag/FITC 熒光素標記VSV-G tag標簽抗體IgG
N-芴甲氧羰基-L-谷 1-烯基酯 99%硫丹 分析標準品,98%(劇品)Anti-VSV-G tag/HRP 辣根過氧化物標記VSV-G tag標簽抗體IgG
N-芴甲氧羰基-L-谷 5-烯基酯 96%標準溶液 100μg/ml,u=2%(劇品)Anti-VTG/FITC 熒光素標記卵黃蛋白原抗體IgG
N-芴甲氧羰基甘五氟苯酯 97%標準溶液 10μg/ml,u=3%(劇品)Anti-VTN/FITC 熒光素標記玻璃粘連蛋白抗體IgG
H-Gln-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh酮中乙嘧硫磷標準溶液 100μg/ml,u=2%Anti-VWCE/URG11/FITC 熒光素標記乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗體IgG
H-Gln(Trt)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh酮中乙嘧硫磷標準溶液 10μg/ml,u=2%Anti-VWF/FITC 熒光素標記血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體IgG
H-Glu-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh烯炔菊酯 分析標準品,97%Anti-VWF/RBITC 紅色羅丹明標記血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體IgG