詳細介紹
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1233 |
商品介紹:
名稱 大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞 2.組織來源:胎盤組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞分離自胎盤組織;胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官,由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),而雙方保持相當?shù)莫毩⑿浴LケP還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,胚胎生長出一些輔助結(jié)構如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,以達到母子間物質(zhì)的交換,這樣的結(jié)構稱假胎盤。絨毛膜是由滋養(yǎng)層和胚外中胚層的壁層構成。胚泡植入子宮內(nèi)膜后,在胚泡表面形成許多絨毛樣的突起,以細胞滋養(yǎng)層為中軸,外裹合體滋養(yǎng)層,稱初級干絨毛。胚外中胚層長入初級干絨毛的中軸,使初級干絨毛變成了次級干絨毛。當絨毛膜的胚外中胚層內(nèi)形成血管網(wǎng)和結(jié)締組織,并與胚體內(nèi)的血管相通時,次級干絨毛改稱三級干絨毛。三級干絨毛末端的細胞滋養(yǎng)層細胞形成細胞滋養(yǎng)層殼。隨著胚胎發(fā)育,叢密絨毛膜與基蛻膜共同構成了胎盤,而平滑絨毛膜則和包蛻膜一起逐漸與壁蛻膜融合。 5.方法簡介: 實驗室分離的大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞采用胰蛋白酶-DNA酶聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞經(jīng)Cytokeratin-7免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R182 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
食蟹猴 CD2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 PD1 / PDCD1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 CD2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EphB2 / Hek5 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CRELD2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL1RL1 / ST2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 C2 / Complement Component 2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD320 / 8D6A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞Bensingtonia yamatoana色素cyp3a11檢測試劑盒
Sporobolomyces ruber色素cyp2d11檢測試劑盒
Candida nitrativorans色素cyp2d12檢測試劑盒
Candida krissii色素cyp2c19檢測試劑盒
Trichosporon laibachii色素cyp3a11檢測試劑盒
Mrakia psychrophila屋塵螨特異性IgG抗體檢測試劑盒
Trichosporon laibachii屋塵螨變應原Derp1 IgG抗體檢測試劑盒
Candida maltosaC-C趨化因子6檢測試劑盒