詳細介紹
反應五要素:
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規格 | 分類 |
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
?
自備物品:
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
間溴氟分子式:175分子量: C6H4BrF英文名稱:Bromo fluorobenzeneCAS號:1073-06-9
4,6-二甲-2-巰嘧分子式:140.21分子量: C6H8N2S英文名稱:4,6- two methyl -2-CAS號:22325-27-5
戊菊酯英文名稱:The cyanideCAS號:51630-58-1分子式:419.91分子量: C25H22ClNO3
7-羥喹啉分子式:145.16分子量: C9H7NO英文名稱:7- hydroxy groupCAS號:580-20-1
3-溴三氟硼酸鉀分子式:262.9分子量: C6H4BBrF3K英文名稱:3- Bromophenyl three kbf4CAS號:374564-34-8
堿性藍6B英文名稱:Alkaline blue 6BCAS號:8004-90-8分子式:1231.42分子量: C74H59N6NaO7S2
2-甲-5-甲氧并噻唑分子式:179.24分子量: C9H9NOS英文名稱:2甲- 5 -甲氧并噻唑CAS號:2941-69-7
2,6-二甲氧萘分子式:188.22分子量: C12H12O2英文名稱:2,6- two aCAS號:5486-55-5
1,3-二硝-d4分子式:172.13分子量: C6D4N2O4英文名稱:1,3- two nitrobenzene -d4CAS號:54247-05-1
4,5-二嘧分子式:110.12分子量: C4H6N4英文名稱:4, 5- twoCAS號:13754-19-3
反式-4-(4-氟)-3-羥甲-1-甲分子式:223.29分子量: C13H18FNO英文名稱:Trans -4- (4- difluorophenyl) -3- hydroxy -1- methyl piperidineCAS號:105812-81-5
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測試劑盒方法HPV16-E7 人類乳頭狀瘤病毒16-E7抗體 0.2ml
Donkey Anti-rabbit IgG/APC APC標記的驢抗兔IgG 0.1ml
Mouse Anti-human IgM/PE PE標記的小鼠抗人IgM 0.1ml
CGP-39/YKL-40 軟骨糖蛋白39抗體 0.1ml
CDC2L6 細胞分裂周期2樣蛋白激酶6抗體 0.2ml
PCDHA7 原鈣粘附蛋白α7抗體 0.2ml
KIRREL1/NEPH1 腎病樣蛋白1抗體 0.2ml
C15orf62 15號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml
Alpha-ENaC 鈉通道蛋白α ENaC 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
Goat Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的羊抗人IgG 0.1ml
AICDA 活化誘導胞嘧啶核苷脫氨酶抗體 0.2ml