詳細介紹
反應五要素:
轉基因植物Bt基因核酸檢測試劑盒圖片參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規格 | 分類 |
轉基因植物Bt基因核酸檢測試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
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自備物品:
轉基因植物Bt基因核酸檢測試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
7-甲-8-硝喹啉分子式:188.19分子量: C10H8N2O2英文名稱:7- methyl -8- nitro groupCAS號:7471-63-8
5--6-硝喹啉分子式:189.17分子量: C9H7N3O2英文名稱:5- amino -6- nitro groupCAS號:35975-00-9
4,4’-二甲聯分子式:182.27分子量: C14H14英文名稱:4,4 '- two methyl groupCAS號:613-33-2
3-氯吲唑分子式:152.58分子量: C7H5ClN2英文名稱:3- indazole chlorideCAS號:29110-74-5
4-羥咔唑分子式:183.21分子量: C12H9NO英文名稱:4- hydroxy carbazoleCAS號:52602-39-8
4-甲硫酸氫氯酸嘧分子式:221.7分子量: C8H12ClNO2S英文名稱:4- methyl benzyl sulfateCAS號:4393-16-2
磷酸二氫鋁分子式:317.94分子量: AlH6O12P3英文名稱:Two hydrogen phosphateCAS號:13530-50-2
3--4-吡甲醛分子式:122.12分子量: C6H6N2O英文名稱:3- amino -4- pyridine formaldehydeCAS號:55279-29-3
(4S,4'S)-2,2'-(戊烷-3,3'-二)雙(4-芐-4,5-二氫惡唑)分子式:390.53分子量: C25H30N2O2英文名稱:(4S,4)-2,2'-(戊烷- 3,3’-二)雙(4芐- 4,5 -二氫惡唑)CAS號:160191-64-0
性湖藍V英文名稱:Alphaurine VCAS號:129-17-9分子式:566.66分子量: C27H31N2NaO6S2
異茴芹內酯英文名稱:IsopimpinellinCAS號:482-27-9分子式:246.22分子量:C13H10O5
轉基因植物Bt基因核酸檢測試劑盒圖片Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗狗IgG 0.1ml
Notch1/MOTC 跨膜受體蛋白Notch-1抗體 0.1ml
Agpat2 溶血磷脂酸?;D移酶β抗體 0.2ml
MTA2 轉移相關蛋白2抗體 0.2ml
Calreticulin 鈣網蛋白抗體 0.2ml
KLHDC9 KLHDC9蛋白抗體 0.2ml
Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體 0.1ml
KCNMB1/Maxi Potassium channel beta 鈣激活鉀通道蛋白β1抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗牛IgM 0.1ml
phospho-TRADD(Ser299) 磷酸化腫瘤壞死因子受體1相關死亡域蛋白抗體 0.1ml
CD63/MLA1 黑色素瘤相關抗原抗體 0.1ml
K Cadherin 鈣粘蛋白6抗體 0.2ml