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發酵罐使用的時候怎么確定菌體生長狀況
閱讀:461 發布時間:2018-7-1發酵罐使用的時候怎么確定菌體生長狀況
發酵罐為研究小型發酵罐分批培養過程中大腸桿菌的菌體生長狀況,本實驗以分批培養法培養大腸桿菌,通過控制發酵過程的溫度、溶氧、攪拌速度、空氣流量、泡沫水平等參數,并每小時取樣測DO值和還原糖量,制作菌體生長曲線,以此判斷大腸桿菌的生長發酵狀況。本實驗選用生長迅速的大腸桿菌進行發酵罐的培養,同時定時地取樣測定,包括對菌體進行鏡檢、測定不同時期發酵液的細菌濁度以及殘留還原糖的變化發酵過程中,微生物的生長呈一定規律,掌握微生物生長曲線,可以防止菌種老化衰退、防止有害產物積累、提高發酵的效率,對生產有指導意義。通過測定生化指標,可大體了解菌體生長曲線,并在此基礎上采取適當措施促進微生物生長。生長曲線中,微生物產生代謝產物或抗生素多在對數期末期或穩定期,因此可采取方法延長次期,如通過發酵罐等方法,不斷調節培養基的pH值,去除有害物質,增加適量的氣體和營養物質,使微生物延遲進入或不進入衰退期,從而生產出大量的有用的代謝產物。發酵罐是生化、食品、醫藥、農藥、化工等生產領域的常用設備,雖然發酵罐的類型很多,如自吸式、氣升式等。但發酵工廠用得多的還是傳統的通用發酵罐(機械攪拌發酵罐)[2]。發酵罐配備控制系統,它主要是對發酵過程中的各種參數如溫度、pH、溶解氧、攪拌速度、空氣流量、補料、泡沫水平等進行設定、顯示、記錄以及對這些參數進行反饋調節控制配制培養基 1) 配制種子固體培養基100mL,分裝試管,0.1MPa滅菌20min,然后擺成斜面。 2) 配制種子培養液600mL,分裝50mL于一個250mL三角瓶中(作一級種子瓶),余下550mL平均分裝于三個500mL三角瓶中(作二級種子用),同上滅菌。 1.2.2接種與培養
1) 上罐前兩天,從冰箱中取出菌種轉接斜面,37℃培養24h。 2) 上罐前一天,由斜面菌種轉接一級種子瓶, 37℃振蕩培養12h,然后轉接二級種子瓶, 37℃振蕩培養10h。 1.3上罐前的準備及實罐滅菌 1) 洗凈發酵罐及各聯接膠管 2) 配制發酵培養基5.0L,置發酵罐內,加入幾滴泡敵。 3) 校正pH電極和溶氧(DO)電極。 ) 把電極插口、取樣管、補料口、消泡劑料瓶等固定、密封好后,開夾套出、進水閥V2、W1,發酵罐使夾套充滿水,用保護罩蓋住罐蓋及發酵罐,用傾倒螺釘鎖緊法蘭,開保護罩頂部排氣閥V4,啟動蒸氣發生器,啟動攪拌馬達,調轉速300r/min,開啟冷凝水出水閥V1,開啟蒸氣閥門S1,進行在位滅菌。 5) 當保護罩頂部閥門V4有蒸氣排出時,2min后關閉閥門,當罐溫接近滅菌溫度時,微開閥V4適當排氣,并調整蒸氣閥S1維持罐溫。保溫結束后,關蒸氣閥S1,全開冷凝水出水閥V1,開進水閥W3,發酵罐將溫度設定在37℃,切入自動。 6) 當溫度降到100℃以下,緩緩開排氣閥V4,使保護罩頂壓力表指示為零,移去保護罩。 7) 連接通氣管路,將進氣過濾器K7口與控制臺左側空氣出口連通,開彈簧夾,接通空氣壓縮機電源,對發酵罐進行通氣,調整空氣流量3~5L/min。 8) 當溫度達到37℃時,將預先滅菌的pH電極、DO電極(75%酒精消毒、UV消毒)接入發酵罐,連接各電極導線。