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對膜蛋白提取有高特異性和高產量

每個批次的PureCube凝膠均是按照嚴格的質量標準體系生產并嚴格檢驗，以確保每一批分裝的產品都有高的蛋白結合能力。通過與特異性抗原表位相互作用，輔以優化過的純化操作步驟，能使目標蛋白在洗脫組分中有高產出量。圖1是對CXC趨化因子受體4(CXCR4)的純化溶于Fos-Choline®-14的帶標簽蛋白通過大腸桿菌表達，再經由含PureCube Rho1D4瓊脂糖的層析柱純化。用Rho1D4多肽作為洗脫液，4次洗脫組分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目標蛋白。蛋白印跡結果說明CXCR4大約是65 kDa和35 kDa。這些條帶是39.7 kDa膜蛋白的二聚體和單體。單體、二聚體的分離以及去除洗脫肽段，可以通過排阻層析的方法實現。

圖1：用PureCube Rho1D4瓊脂糖純化CXCR4。

大腸桿菌裂解液（TL）溶解在Fos-Choline®-14中，溶解的組分（SF）與裝有Rho1D4抗體的免疫親和層析柱相結合。平衡組分中沒有測得損失目標蛋白，經分光光度計測定，CXCR4在洗脫組分（E1-E4）中得濃度范圍在0.6-1.0mg/mL。

表1：有文獻報道的使用Rho1D4系統純化膜蛋白的純度和產率。盡管很多用Rho1D4系統純化的膜蛋白均為G蛋白偶聯受體家族，該系統也可以有助于辨別其他如轉運體之類的膜蛋白。 IAC：免疫親和層析；SEC：排阻層析。

在20世紀80年代發現Rho1D4表位和配對抗體，當時通過將抗體偶聯到Sepharose®上來純化在猴腎細胞中表達的牛視紫紅質。自此，Rho1D4系統（標簽，偶聯抗體的親和基質，洗脫肽）開始用于少量膜蛋白的純化，包括G蛋白偶聯受體（GPCR），ATP結合轉運體，溶質反向轉運體和一個四次跨膜蛋白。

圖2：假設有3個跨膜域的膜蛋白。Rho1D4標簽加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A

通過轉基因修飾在目標膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4標簽（如圖1）。一旦配有該序列，即可用裝載有Rho1D4抗體的親和基質捕獲目標蛋白，并隨后通過添加過量Rho1D4多肽，產生競爭性結合基質表面抗體來洗脫目標蛋白，用此方法洗脫比改變pH值等方式更加溫和。

Rho1D4系統的一大優勢是抗體與表位相互作用特異性非常高。而其另一大優勢是洗脫目的蛋白收率相當高。利用Rho1D4純化的目標蛋白可用于功能性研究，如：配體結合的特性，蛋白與蛋白間的相互作用。

*純度是從低濃度經一步Rho1D4 IAC在反應溶液中得出的；產率是在洗脫成分濃縮并過SEC柱后計算。

產品優勢：

（1）德國制造，歐美膜蛋白純化產品供應商；

（2）膜蛋白純化的理想解決方案，可以獲得純凈且活性的膜蛋白；

（3）結合能力可高達3-4mg/mL；

（4）高度特異性純化帶有標簽的重組膜蛋白；

（5）可重復再生使用；

（6）好的流量分布和小空隙體積；

（7）兼容常用的色譜儀器；

（8）配合Nanodisc使用，是目前非常有效的膜蛋白提取解決方案，數家科研院校正在使用

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