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iBind(Flex) 蛋白質免疫印跡處理系統
  • iBind(Flex) 蛋白質免疫印跡處理系統
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更新時間:2024-12-16 11:57:55瀏覽次數:37評價

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靈活的規格,只需更少的一抗用量,重復性更好的結果Invitrogen™iBind™Flex蛋白質免疫印跡處理系統采用靈活的印跡處理方法,可助您顯著縮短操作時間,檢測不同規格的印跡膜,并輕松優化抗體用量

    靈活的規格,只需更少的一抗用量,重復性更好的結果

    Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白質免疫印跡處理系統采用靈活的印跡處理方法,可助您顯著縮短操作時間,檢測不同規格的印跡膜,并輕松優化抗體用量。該系統利用 順序側流技術, (毛細管作用的一種簡單形式),可自動化完成Western Blot實驗中所有的抗體孵育和洗滌步驟,您只需將一抗、二抗溶液和洗滌緩沖液加入到設備中,設備即可自動進行相關操作。在3小時內,就能得到可立即用于最終檢測的印跡膜。iBind Flex蛋白質免疫印跡處理系統在帶來靈活的解決方案的同時,也兼顧了自動化的便捷性。

    • 靈活性—可處理1張中型印跡膜、2張微型印跡膜或6張垂直剪切膜條,并可在一次實驗的不同膜上采用不同的抗體
    • 兼容性—可使用硝酸纖維素膜或PVDF膜,可用直接標記的一抗或二抗進行檢測(AP、HRP或熒光標記)
    • 節約成本—用于蛋白質免疫印跡時,比傳統孵育方式最多可節省80%的一抗


    微型印跡膜結果

    只需更少的一抗,就能獲得更好的蛋白質免疫印跡結果。對比手動處理(在孵育盒中進行孵育和洗滌步驟)和Invitrogen™ iBind™ Flex系統處理的蛋白質免疫印跡。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝膠和MES SDS電泳緩沖液分離樣本,隨后,使用iBlot™ 2干轉系統轉印至硝酸纖維素膜上。每塊凝膠具有10個泳道,樣本為2倍梯度稀釋的293細胞提取物(30 µg-0.06 µg)。使用下述條件進行抗體孵育和洗滌后,將印跡膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分鐘,并使用成像系統顯色。

    • MEK2 (45 kDa)——兔抗MEK2抗體,按1:1000 稀釋(用于iBind系統:將2µL抗體溶于2mL iBind溶液中,用于手動孵育盒操作時,將10µL抗體溶于10mL 緩沖液中)。
    • Securin(428 kDa)——兔抗Securin抗體,按1:1000 稀釋(用于iBind系統:將2µL抗體溶于2mL iBind溶液中,用于手動孵育盒操作時,將10µL抗體溶于10mL 緩沖液中)。
    • 二抗:山羊抗兔IgG,使用iBind系統,按1:600稀釋(3.33 µL抗體溶于2mL iBind溶液中),用于手動孵育盒操作時,按1:1800稀釋(將5.55 µL抗體溶于10mL iBind溶液中)。


    膜條結果

    使用垂直剪切膜條和熒光檢測都獲得了出眾的蛋白質免疫印跡結果。 對比手動處理(在孵育盒中進行孵育和洗滌步驟)和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白質免疫印跡處理系統處理的印跡膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝膠和MES SDS電泳緩沖液分離樣本,隨后,使用iBlot™ 2干轉系統轉印至硝酸纖維素膜上,將每張印跡膜剪切成3泳道膜條。最后,使用成像儀進行成像。

    樣本和泳道如下所示:

    • 泳道 1:  Thermo Scientific™ PageRuler™預染NIR蛋白分子量標記(3 µL)
    • 膜條 1:  磷酸化Akt提取物(15 µg、7.5 µg、3.75 µg)和Elk-1融合蛋白(150 ng、75 ng、37.5 ng)
    • 膜條 2:  HeLa細胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)
    • 膜條 3:  磷酸化Akt提取物(15 µg、7.5 µg、3.75 µg)
    • 膜條 4:  Elk-1融合蛋白(150 ng、75 ng、37.5 ng)
    • 膜條 5:  HeLa細胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)
    • 膜條 6:  HeLa細胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)

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