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目錄:賽默飛世爾科技(中國)有限公司>>PCR/RT-PCR>>定量PCR試劑>> RT-qPCR用 Maxima鏈cDNA合成試劑盒

RT-qPCR用 Maxima鏈cDNA合成試劑盒
  • RT-qPCR用 Maxima鏈cDNA合成試劑盒
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更新時間:2024-12-16 13:56:22瀏覽次數:43評價

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RT-qPCR用Maxima鏈cDNA合成試劑盒RT-qPCR用ThermoScientificMaxima鏈cDNA合成試劑盒是一種針對兩步法定量RT-PCR(RT-qPCR)應用中的cDNA合成進行優化的便捷系統

    RT-qPCR用 Maxima鏈cDNA合成試劑盒

    RT-qPCR 用 Thermo Scientific Maxima 鏈 cDNA 合成試劑盒是一種針對兩步法定量 RT-PCR (RT-qPCR) 應用中的 cDNA 合成進行優化的便捷系統。該試劑盒采用 Maxima 逆轉錄酶 (RT),這是 M-MuLV RT 經體外進化而得到的一種高級酶。與野生型 M-MuLV RT 相比,該酶具有較高的熱穩定性和耐受性且 cDNA 合成速率提高。

    RT-qPCR 用 Maxima 鏈 cDNA 合成試劑盒能夠在較高溫度(42 至 65°C)下從較寬范圍的 RNA 總量(1 pg 至 5 µg)進行可重現的 cDNA 合成。合成反應可在15至30分鐘內完成。RT-qPCR 用 Maxima 鏈 cDNA 合成試劑盒組分已預混合,因而可節省時間并減少可能出現的移液錯誤。

    Features

     
    • 以寬范圍(0.01 pg – 5 μg)的起始RNA量可重復性地合成cDNA 。
    • 提高了合成效率 – 15分鐘內完成cDNA合成。
    • 提高了反應溫度 – 可高達60°C。
    • 方便的設計 – 預混合溶液以方便在RT-qPCR 中的應用。
    Applications
     
    • 兩步 RT-qPCR。
    說明
    Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit是一個適用于兩步實時定量PCR(RT-qPCR)的優化了cDNA合成的方便體系。該試劑盒采用了Maxima® Reverse Transcriptase,這是一個從M-MuLV RT進化衍生出的高效逆轉錄酶。該酶具有高熱穩定性,耐用性及提高的的合成率。Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit能以寬范圍(1 pg to 5 µg)的初始RNA量在提高的溫度下(50-60°C)可重復性地合成cDNA。合成反應能在15-30分鐘內完成。

    Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit的組分對于RT-qPCR的使用者來說非常方便。試劑盒的成分是預混合好的以節省時間和降低可能的移液錯誤。試劑盒組分包括Maxima® Enzyme Mix, 5X Reaction Mix, 水(不含核酸酶)。

    Maxima® Enzyme Mix 包含Maxima®逆轉錄酶和RiboLock™核糖核酸酶抑制劑。重組的RiboLock™抑制劑有效地保護RNA模板在溫度高至55°C的范圍內不被RNases A、B 和 C降解。

    5X Reaction Mix 包含了余下的反應組分:反應緩沖液,dNTPs, oligo (dT)18 和隨機引物六聚體。

    Water, nuclease-free 適用于反應體系的搭建和樣品RNA 的稀釋。它已經通過測試不含有核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶。

     
    質量控制
    已在在兩步RT-qPCR中進行了功能測試,即以不同起始量(5 ng-0.5 fg)的 RNA為轉錄物逆轉錄反應及隨后的采用Maxima® SYBR Green/ROX qPCR Master Mix的擴增反應。效率在90-110%的范圍內,斜率在-3.09 和 -3.58之間,相關系數>0.99。
     
    組分
    • Maxima® Enzyme Mix
    • 5X Reaction Mix
    • Water, nuclease-free
    • 詳細的使用說明

    圖1。高靈敏度兩步RT-qPCR。
    A – 擴增圖。
    B – 標準曲線。
    基于Jurkat 細胞不同量的總RNA (5 μg, 2.5 μg, 1 μg, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg)的人PPP1CA 基因的擴增。通過Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR (#K1641)合成鏈cDNA。采用針對PPP1CA的TaqMan® 分析和Maxima® Probe /ROX qPCR Master Mix (2X) 擴增鏈cDNA。反應在ABI 7500 Real-Time PCR 儀器上操作進行。1 pg 的總RNA被成功檢測出。反應效率是105%,斜率為3.29,R2 =0.999。
    圖2。采用Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR得到的可重復性的RT-qPCR 結果. 。
    鏈的cDNA由100 ng-1 pg 的 Jurkat細胞總RNA 和Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit和從16個復制反應中合成得到。合成出的cDNA在隨后的在ABI 7500 實時PCR儀上進行的qPCR 反應作為模板應用。平行的逆轉錄酶反應顯示出以寬范圍RNA 起始量合成cDNA的可重復性和低變化性(<1% SD/Cq)。
    圖3。Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR的高產量和高靈敏度。
    E.coli 23SRNA基因的擴增基于10倍梯度稀釋的總RNA (30 ng to 3 fg)。鏈的cDNA 的產生采用了Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR(紅色) 以及來自其他供應商逆轉錄試劑盒(藍色)。cDNA的擴增采用Maxima® SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (#K0221/2/3)在ABI 7500 實時PCR儀上進行。在采用了Maxima® First Strand cDNA Synthesis Kit的反應,全部的起始RNA量(30 ng – 3 fg) 以較低的Cq 和102% 的反應效率成功地檢測出。對照試劑盒沒有檢測出的3 fg 稀釋度的RNA且qPCR產物的產率也相對較低。

     

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