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通用 RT-PCR 試劑盒(M-MLV)
貨號 :RP1100
規格:25T/50T/100T
保存 :-20℃保存,避免反復凍融,復檢期為 1 年。
產品內容 :
試劑盒組成 | 25 次 | 50 次 | 100 次 |
M-MLV(200U/ul) | 25ul | 50ul | 50ul×2 |
5×M-MLV Buffer | 100ul | 200ul | 400ul |
Oligo(dT) 16 (10uM) | 50ul | 100ul | 200ul |
RNasin(40U/ul) | 12.5ul | 25ul | 50ul |
dNTPs(10mM) | 50ul | 100ul | 200ul |
Taq Polymerase(5U/ul) | 12.5ul | 25ul | 50ul |
10×PCR Buffer | 125ul | 250ul | 500ul |
RNase-free ddH 2 O | 500ul | 1ml | 1ml×2 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 1 份 |
產品簡介:
本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉錄反應以及隨后的PCR擴增。 它采用M-MLV 進行反轉錄反應,能夠獲得較長的反轉錄產物。同時,在 20ul 反轉錄體系和 50ul PCR 反應體系中,還可以一次性得到足夠量的 PCR 產物用于后續的克隆實驗。
本試劑盒中配置的酶均為進口的酶。RT 酶采用進口的 M-MLV,所以 cDNA 更長,基因的信息保留得更完整! 反轉錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導致實驗失敗的風險。 本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。
操作步驟 :
一、反轉錄反應
1、在冰浴的無 RNase 的離心管中加入如下反應成分:
1-5ug 總 RNA 或 50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT) 16 或 2 pmole 基因特異性引物
補 RNase-free ddH 2 O 14.5ul
2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 2min,簡短離心收集反應液后加入以下各組分:
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul M-MLV
3、42℃溫浴 60min,如果是用隨機引物,請先將離心管置 25℃溫浴 10min,再 42℃溫浴 60min。
4、用 RNase-free ddH2O 將反應體系稀釋到 50ul,取 2-5ul 進行 PCR 反應。
二 、PCR 反應
1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應體系:
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物(用戶自備 10um) 1ul
下游引物(用戶自備 10um) 1ul
RT 反應產物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH 2 O x ul
Total Volume 50ul
2、混勻后短暫離心,PCR 儀擴增,瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。
注意事項 :
1、 用于 cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用 DEPC 進行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時,首先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進行過濾除菌處理。
2、 試劑盒的各組分應在-20℃保存,避免反復凍融,有效期 12 個月。
3、 RNA 樣品要避免反復多次凍融,應使 RNA 在冰浴中處于融化狀態。
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通用 RT-PCR 試劑盒(M-MLV)訂購說明:
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通用 RT-PCR 試劑盒(M-MLV)運輸說明:
極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
常溫產品:常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。