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細胞生長受溫度、滲透壓等外界因素的影響。
一般哺乳類及禽類細胞體外培養的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細胞的生長。
細胞在高滲溶液或低滲溶液中,可以立即發生皺縮或腫脹、破裂。理想的滲透壓因細胞的類型及種族而異,人血漿滲透壓為290mmol/L,被視為是體外培養人類細胞的理想滲透壓。哺乳類動物細胞的滲透壓一般為290~300mmol/L。人胚肺成纖維細胞為250~325mmol/L,鼠則為310mmol/L左右。在實際應用中,260~320mmol/L的滲透壓可適于大多數細胞。
無毒和無菌是體外培養細胞的首要環境條件。細胞在活體內,偶爾有細菌或有害物質入侵,因體內有強大的解毒系統和免疫系統,可將其解毒或清除,而不易受損害。但在離體的環境中,失去了防御系統,一旦有害物質入侵或細菌污染,可導致細胞死亡,前功盡棄。
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培養細胞生長過程:潛伏期→指數增生期→停滯期
細胞貼壁后經過一個潛伏階段,才進入生長和增殖期.原代培養細胞潛伏期,約24-96 小時或更長, 連續細胞系和腫瘤細胞潛伏期短,僅需6-24 小時
指數增生期(logarithmic growth phase)這是細胞增殖zui旺盛的階段,分裂相細胞增多。指數增生期細胞分裂相數量可作為判定細胞生長是否旺盛的一個重要標志。一般細胞的分裂指數介于0.1%-0.5%,原代細胞分裂指數較低,而連續細胞和腫瘤細胞分裂相指數可高達3%-5%。
細胞數量達到飽和密度后,如不及時進行傳代,細胞就會停止增殖,進入停止期停滯期細胞雖不增殖,但仍有代謝活動。如不進行分離傳代,細胞會因培養液中營養耗盡、代謝產物積聚、pH 下降等因素中毒,出現形態改變,貼壁細胞會脫落,嚴重的會發生死亡,因此,應及時傳代。
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