詳細介紹
Phos-tag™ 黃色熒光染料
Phos-tag™凝膠熒光染料,是一種可在生理pH范圍內,對凝膠中的磷酸化蛋白進行染色的熒光染料。進行了SDS-PAGE,用本產品處理聚丙烯酰胺凝膠,可以對磷酸化蛋白進行特異性染色。
本系列有波長不同的黃、品紅、藍綠、淺綠四種顏色。每管規格為0.2毫克,可對約20個迷你凝膠進行染色。
購買前請注意:
使用Phos-tag™凝膠熒光染料,需要用到Phos-tagTM 5×染色通用混合溶液(產品編號:383-15231)。請一同購買。
◆特點
● 高靈敏度
● 在生理pH下即可染色
● 選擇性與pSer、 pTyr、 pHis以及pAsp殘基結合
● 無需放射性物質、化學物質標簽、抗體
● 2小時內完成染色
◆產品對比
其他公司產品A ● 凝膠pH:2~4 ● 5個步驟(固定、清洗、染色、脫色、清洗) ● 所需時間:≧5小時 ● 溶液更換次數:11次 ● 卵清蛋白檢測上限:~5ng/lane | Phos-tag™品紅 ● 凝膠pH:7~8(不進行脫磷酸化) ● 3個步驟(固定、染色、清洗) ● 所需時間:≦2小時 ● 溶液更換次數:4次 ● 卵清蛋白檢測上限:~1ng/lane |
◆應用實例①
磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的染色Phos-tag™淺綠
Lane.No.()內為磷酸基團數目
1. Marker 2.α-酪蛋白(9P) 3.經ALP處理的α-酪蛋白 4.β-酪蛋白(5P) 5.經ALP處理的β-酪蛋白 6.卵清蛋白(2P) | 7.經ALP處理的卵清蛋白 8.胃蛋白酶(1P) 9.經ALP處理的胃蛋白酶 10.β-半乳糖苷酶 11.牛血清白蛋白 12.碳酸酐酶 |
Phos-tag™淺綠染料選擇性:用Phos-tag™淺綠對10%(w/v)的PAGE膠進行染色,其中分別含有四組完整的以及經ALP(堿性磷酸酶)處理的磷酸蛋白(α-酪蛋白,β-酪蛋白,卵清蛋白和胃蛋白酶各1微克)(左),然后使用考馬斯亮藍CBB G-250染色(右)。
成功特異性地檢測出SDS-PAGE后的磷酸化蛋白。
數據提供:廣島大學研究生院 醫學系科學研究科 醫藥分子機能科學研究室 木下惠美子老師、木下英司老師、小池透老師
◆應用實例②
使用Phos-tag™熒光凝膠染料的組氨酸、天門冬氨酸的磷酸化分析
細菌通過將信息從組氨酸激酶EnvZ傳遞到應答調控子OmpR來調節基因的表達。分別分析有自磷酸化能力的EnvZ激酶和被EnvZ催化的OmpR中組氨酸和天門冬氨酸的磷酸化。
可以確認Phos-tag™品紅和Phos-tag™ SDS-PAGE這兩種試劑中的His和Asp的磷酸化隨激酶的處理時間經過不斷增強。尤其是使用Phos-tag™品紅時,可以僅檢測出His磷酸化或Asp磷酸化。
數據提供:廣島大學研究生院 醫學系科學研究科 醫藥分子機能科學研究室 木下惠美子老師、木下英司老師、小池透老師
◆應用實例③
用于篩選組氨酸激酶抑制劑(新型抗生素)
使用Phos-tag™熒光凝膠染料,篩選組氨酸激酶抑制劑。
證實磷酸化依賴組氨酸激酶抑制劑濃度被抑制。
數據提供:廣島大學研究生院 醫學系科學研究科 醫藥分子機能科學研究室 木下惠美子老師、木下英司老師、小池透老師
◆使用方法
※調整平衡及清洗溶液以及染色溶液必須使用Phos-tagTM 5×染色通用混合溶液 (產品編號:383-15231)。
◆激發波長/熒光波長
Phos-tag™黃 | Phos-tag™品紅 |
Ex/Em=505納米/514納米
| Ex/Em=547納米/561納米
|
Phos-tag™藍綠 | Phos-tag™淺綠 |
Ex/Em=643納米/661納米 | Ex/Em=551納米/564納米 |
◆產品列表
產品編號 | 產品名稱 | 規格 |
380-15241 | Phos-tag™黃色熒光染料 | 0.2毫克 |
386-15221 | Phos-tag™品紅熒光染料 | 0.2毫克 |
382-15201 | Phos-tag™淺綠熒光染料 | 0.2毫克 |
389-15211 | Phos-tag™藍綠熒光染料 | 0.2毫克 |
383-15231 | Phos-tag™ 5×染色通用混合溶液 | 1 EA |
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