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人生第yi測，別讓孩子輸在“起跑線"上

原創(chuàng) 飛飛 賽默飛色譜與質(zhì)譜中國

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新生兒的健康

都說“十月懷胎，一朝分娩"，母親是偉大的，每對父母都希望有一個健康的bao寶。但是隨著人類的發(fā)展和社會的進(jìn)步，也帶來了環(huán)境的污染，加之工作壓力，生活不規(guī)律等眾多因素影響，以及家族伴染色體遺傳疾病等，使我們?nèi)祟惐驹摀碛械墓δ芡嘶热缁蚴钱a(chǎn)生帶有先天性代謝缺陷疾病的嬰兒，新生兒的健康與否牽動著每個父母的心。

 

 

 

 

 

怎么辦？

 

因此，在新生兒群體中，用快速、敏感的實(shí)驗(yàn)室方法對新生兒的遺傳代謝病、先天性內(nèi)分泌異常以及某些危害嚴(yán)重的遺傳性疾病進(jìn)行篩查，對那些患病的新生兒在臨床癥狀尚未表現(xiàn)之前或表現(xiàn)輕微時(shí)通過篩查，得以早期診斷、早期zhi療，防止機(jī)體組織器官發(fā)生不可逆的損傷。避免患兒發(fā)生智力低下、嚴(yán)重的疾病或死亡。

國外在早年間就已經(jīng)對ben丙酮尿癥(phenylketonuria，PKU) 篩查進(jìn)行了研究，并將串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（MS/MS）應(yīng)用于新生兒篩查，我國于1994年10月頒布了《中華人民共和國母嬰保健法》，以法律形式確定了新生兒疾病篩查在疾病預(yù)防發(fā)面的地位，衛(wèi)生部于2010年11月制訂了《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范（2010年版）》，對我國目前的兩個主要篩查病種PKU及先天性甲狀腺功能減低癥（congenital hypothyroidism，CH）的篩查進(jìn)行了進(jìn)一步的規(guī)范指導(dǎo)，其新生兒篩查工作已在全國范圍內(nèi)得到普及。

 

賽默飛有辦法

賽默飛一直致力于為各行各業(yè)提供有力的檢測利器。針對新生兒篩查技術(shù)的不斷發(fā)展，賽默飛開發(fā)了利用z新三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用產(chǎn)品TSQ9000快速檢測新生兒尿液中134種有機(jī)酸的分析方法，利用正構(gòu)烷烴進(jìn)行保留時(shí)間校正，操作方便快捷，靈敏度高，可為40種新生兒遺傳代謝疾病的診斷提供有力的依據(jù)。

 

 

 

 

01樣品制備

有機(jī)酸類一般不易氣化，因此需對其進(jìn)行衍生化處理（BSTFA+1%TMCS）以增強(qiáng)其氣化程度。將已測定肌酐含量的尿液混合均勻，吸取相當(dāng)于0.2mg肌酐的尿液，加到15mL離心管中，加入20μL脲酶（1 unit/μL），渦旋混合后置于37oC恒溫30min，加入事先計(jì)算體積的內(nèi)標(biāo)溶液（MGA和C24：0.5mg/mL，TA：1.0mg/mL）和蒸餾水，使總液量達(dá)到2mL，渦旋混合，然后加入500μL5%鹽酸羥銨和400μL 2.5N氫yang化鈉溶液，混勻，室溫靜置60min氧化，加入350μL6N鹽酸溶液，混勻。（此時(shí)，樣品處理可以暫停，放入4℃冰箱冷藏）用乙酸乙酯萃取兩次，渦旋、離心，每次6mL，合并兩次萃取液至于離心管中，加入5g，渦旋、離心，轉(zhuǎn)移萃取液至新離心管中，氮吹至1mL左右，轉(zhuǎn)移至1.5mL進(jìn)樣瓶中，氮吹至干，加入100μL BSTFA+1%TMCS 80oC衍生化30min，之后轉(zhuǎn)移至內(nèi)插管中，進(jìn)樣測定。

 

02檢測難點(diǎn)及注意事項(xiàng)

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難點(diǎn)一：化合物較多，標(biāo)液難買且不易互溶

解決辦法：利用每種化合物的保留指數(shù)，通過正構(gòu)烷烴的保留指數(shù)和保留時(shí)間計(jì)算出每種化合物的保留時(shí)間，無需購買標(biāo)液，直接測定樣品。

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難點(diǎn)二：無需標(biāo)液，排除假陽性

解決辦法：SIM/Full Scan同時(shí)采集數(shù)據(jù)

在檢測結(jié)果中如果出現(xiàn)較大色譜峰時(shí)，可通過全掃數(shù)據(jù)進(jìn)行NIST譜庫檢索，以確定該化合物。

 

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難點(diǎn)三：無需標(biāo)液，如何定量

解決辦法：利用半定量法進(jìn)行定量

如下圖所示，在樣品中加入已知含量的內(nèi)標(biāo)十七烷酸（MGA）,利用目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)（MGA）峰面積比例計(jì)算出樣品中有機(jī)酸的含量。建立了TraceFinder及變色龍兩種工作軟件方法，滿足不同用戶使用。

注意事項(xiàng)：由于衍生化試劑遇水分解失效，所以要盡量除去樣品中水分，吸取衍生化試劑時(shí)盡量減少其暴露在空氣中的時(shí)間。以保證重復(fù)性。

 

03實(shí)際樣品測定

利用上述方法進(jìn)行實(shí)際樣品測定，上圖為患有癲癇性腦病的4個月嬰兒尿樣，下圖為正常2個月嬰兒尿樣。

總結(jié)

本方法靈活快捷，操作簡單，重現(xiàn)性好，能夠?yàn)樾律鷥哼z傳代謝疾病的篩查與診斷提供初步的有力依據(jù)。

 

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